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      TMT标记定量

      • 简介
      • 技术优势
      • 实验流程
      • 应用领域
      • 仪器平台
      • 样品要求

      • Thermo ScientificTM公司的TMT (Tandem Mass Tag)标记定量技术和AB SCIEXTM公司的iTRAQ技术都属于二级报告离子定量技术，具有相似的原理（图1）：提取样品中的总蛋白并酶解为多肽，多肽N-term以及末端Lysine侧链基团的游离氨基能够与TMT标签进行共价结合，从而使每条多肽都带上至少一个TMT标签；不同TMT标签具有相同的分子量，但是却有不同的同位素分布，来自不同样品的相同多肽在MS1中同时被分离，经裂解后在MS2中释放出reporter，代表该多肽在对应样品中的相对含量。TMT (iTRAQ)最高可同时标记16 (12)组不同的生物样品，且一次性完成全部样品的定性定量分析，显著的提高了实验通量，降低了定量误差，可发现更细微的生物学差异。

                                             图1. TMT标签结构和定量原理。                                        



      • ●通量与深度的完美结合：

               在质谱本身高通量的基础上，TMT技术又进一步扩大了这种优势，相比SILAC、Dimethyl等标记定量技术，TMT可同时完成多至10个不同样品的定量分析；运用high pH反相HPLC分级为8个组分，每个组分再经low pH反相HPLC分离，两次正交液相分离，显著的提高了鉴定和定量深度。
        ●特异性与灵敏度兼备：

               基于质谱的蛋白质组学精确到单个氨基酸位点，蛋白鉴定准确，灵敏度高，是profiling分析和PTM研究的强大工具。
        ●严格的质量控制：

               数据稳定、重现性好，定量动态范围广，多个样品平行处理极大的降低了实验误差。
        ●专业的数据分析：

               标准的搜库流程，专业的统计和生信分析，出版级的图表展示，完整全面的分析报告。




      • ●疾病标志物筛选
        ●分子机制研究
        ●药物作用靶点研究
        ●特殊功能蛋白质筛选

      • Thermo Scientific EASY-nLC 1200

        Thermo Scientific Q Exactive




      • 样品类型 样品要求
        蛋白质提取物 浓度 >1μg/μl，蛋白质总量 >200μg
        细胞样品 细胞量 >5×106
        组织样品 动物、微生物组织湿重  >100mg
        体液样品 血液体积 >500μl，血清、血浆、脑脊液>500μl，尿液>50ml